Kırım-Kongo kanamalı ateşi ortonairovirusu (CCHFV), biyogüvenlik seviyesi 4 olan Dünya Sağlık Örgütü’nün en öncelikli patojenleri arasındadır. İnfeksiyon insanlarda ölümcül seyredebilen hemorajik ateş hastalığına yol açar. Kene kaynaklı olan bu virus, Asya, Avrupa ve Afrika’daki ülkelerde endemik olup yeni bölgelere de yayılmaktadır. Hastalığın ciddiyetine ve virusun coğrafi yayılmasının yeni salgınlara neden olma potansiyeline rağmen, şu anda hastalığın onaylanmış bir aşısı ve tedavisi bulunmamaktadır. Teşhis ve tedavi gibi tıbbi önlemlerin geliştirilmesi için kritik olan CCHFV viral stokları, yaygın olarak Vero E6 ve SW-13 hücre hatlarında üretilmektedir. Farklı laboratuvarlarda farklı kurumsal yöntemler kullanılmakta olup, virusun üremesi ve titrasyonu için standart, optimal bir sistem üzerinde fikir birliği bulunmamaktadır.
Bu çalışmada, farklı kültür koşulları altında CCHFV’nin replikasyon kinetiği ile ilgili olarak Vero E6 ve SW-13 hücre hatlarının sistematik, yan yana karakterizasyonu gerçekleştirilmiş. SW-13 hücreleri tipik olarak Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu’na göre CO2’siz bir ortamda (SW-13 CO2−) kültürlenir. Bu çalışmada ise, CO2 uyumlu bir kültür ortamı belirlenmiş. (SW-13 CO2+). Bu yeni geliştirilen kültür sistemi, SW-13 CO2 ve Vero E6 kültürleriyle karşılaştırıldığında ise kültür süpernatanlarında en yüksek viral yükü (RNA konsantrasyonu) ve titreyi (bulaşıcı virus konsantrasyonu) göstermiş. Bu optimal viral yayılma sistemi aynı zamanda iki titrasyon yönteminin geliştirilmesine de yol açmış: (i) ticari bir CCHFV antikoru ve bir kolorimetrik okuma kullanan bir immüno-boyama bazlı plak yöntemi ve (ii) basit “excel” hesap makinesinin kullanıldığı, antikor boyama içermeyen, sitopatik etkiye dayalı medyan doku kültürü infeksiyöz doz testi. Bu yöntemlerin, CCHFV’ nin yayılımı ve titrasyonu için tekrarlanabilir, standardize ve kolay uygulanabilir bir platform için temel oluşturabileceği belirtilmiş.
Li H, Smith G, Goolia M, Marszal P, Pickering BS. Comparative characterization of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus cell culture systems with application to propagation and titration methods. Virol J. 2023; 20 (1): 128.
